大家在異構(gòu)體方法開(kāi)發(fā)時(shí)，是不是經(jīng)常會(huì)碰這種情況：緩梯度和等度的分離效果優(yōu)于梯度，但有機(jī)相比例稍高時(shí)，異構(gòu)體間不能完全分離；降低有機(jī)相比例到一定程度后，分離度就無(wú)法再有提高，甚至異構(gòu)體間看著已完全分離，但因?yàn)榉暹^(guò)寬導(dǎo)致積分后分離度不符合要求。無(wú)法通過(guò)調(diào)整有機(jī)相的比例來(lái)達(dá)到峰形與分離度的兼顧，這種情況下，我們真的沒(méi)辦法了嗎？
今天通過(guò)兩個(gè)案例來(lái)給大家介紹一個(gè)小妙招來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題。
案例一
待分離組分部分結(jié)構(gòu)式
實(shí)驗(yàn)一
色譜條件
效果圖
下一步思路
各峰分離度不佳，峰堆在一起，繼續(xù)放緩梯度。
實(shí)驗(yàn)二
色譜條件
效果圖
下一步思路
主峰與前后雜質(zhì)分離度分別為：1.55和1.79，在此基礎(chǔ)上繼續(xù)放緩梯度，發(fā)現(xiàn)沒(méi)有改善。這種情況下，我們通過(guò)在梯度前加一段20分鐘40%有機(jī)相的等度段，使樣品在色譜柱內(nèi)，以一個(gè)較緩慢的速度來(lái)加大各組分間的分離，再通過(guò)梯度的方式使各組分洗脫。
實(shí)驗(yàn)三
色譜條件
效果圖
結(jié)論：主峰與前后雜質(zhì)分離度分別為：1.75和1.84。
可見(jiàn)，這種情況下，我們通過(guò)在梯度前加一段低比例有機(jī)相段（此例中為前20分鐘的這一段），使樣品在色譜柱內(nèi)，以一個(gè)較緩慢的速度移動(dòng)，來(lái)加大各組分間的分離，再通過(guò)梯度的方式使各組分洗脫。這種方式，可以起到一個(gè)比較好的增加分離的效果。
案例二
左羥丙哌嗪結(jié)構(gòu)式
方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，在月旭Utimate Cellu-JR（4.6×250mm，5μm）色譜柱上，兩個(gè)峰一直有一定的分離趨勢(shì)，等度條件下分離度優(yōu)于梯度，但隨著有機(jī)相比例的下降，兩個(gè)峰始終無(wú)法完全分離，而且隨著有機(jī)相比例降低，峰形也在變差。
實(shí)驗(yàn)一
色譜條件
效果圖
下一步思路
兩峰分離度為1.4。
在這個(gè)基礎(chǔ)上，在前20分鐘的70%甲醇比例的等度，使兩個(gè)手性異構(gòu)體在色譜柱內(nèi)以較緩慢的速度移動(dòng)以加大分離。再用5分鐘梯度回到85%甲醇來(lái)加快洗脫以修正峰形。
實(shí)驗(yàn)二
色譜條件
效果圖
結(jié)論：兩成分的分離度1.9。
可見(jiàn)，這種情況下，我們通過(guò)在梯度前加一段低比例有機(jī)相段（此例中為前20分鐘的這一段），使兩個(gè)手性異構(gòu)體在色譜柱內(nèi)以較緩慢的速度移動(dòng)以加大分離。再用5分鐘梯度回到80%甲醇來(lái)加快洗脫以修正峰形。這種方式，可以起到一個(gè)比較好的增加分離的效果。
.348499c.png)